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以下是关于甲苯胺蓝染色的详细介绍:
染色原理
化学结构基础:甲苯胺蓝属于醌亚胺染料类,含有两个发色团(胺基和醌型苯环)和两个助色团。助色团促使染料电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力。
结合机制:甲苯胺蓝中的阳离子具有染色作用,组织细胞中的酸性物质带有负电荷,二者通过静电作用相结合,从而使组织细胞着色。
颜色反应原理:细胞内不同成分与甲苯胺蓝结合后呈现不同颜色,例如细胞核中的核酸等物质与甲苯胺蓝结合后呈蓝色,肥大细胞胞质内的肝素和组织胺等异色性物质与甲苯胺蓝结合呈异染性紫红色。
染色步骤
组织切片常规脱蜡至水:将组织切片依次放入二甲苯 Ⅰ、二甲苯 Ⅱ 中各浸泡 5 分钟脱蜡,然后依次经过无水乙醇、95% 乙醇、75% 乙醇各浸泡 1 分钟,最后用自来水冲洗数秒。
染色:将脱蜡至水的切片放入甲苯胺蓝液中浸染,时间为 5-30 分钟,具体时间根据样本类型、染色液浓度和实验目的等因素调整。
水洗:染色完成后,将切片在流动水中冲洗,以去除多余的染料。
分化:将切片放入冰醋酸液中分化,在镜下观察,直到胞核和颗粒清晰。
再次水洗:用流水冲洗切片,去除分化液。
脱水:依次用各级酒精(如 85% 乙醇、95% 乙醇、无水乙醇)进行脱水,每次浸泡 1 分钟左右。
透明:将脱水后的切片放入二甲苯中浸泡 2 分钟,使组织透明。
封片:在透明后的切片上滴加中性树胶,盖上盖玻片封固。