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快速革兰氏染色是一种对细菌进行快速鉴别的染色方法,以下是其具体步骤:
涂片:取少量细菌培养物,均匀涂布在载玻片上,自然干燥或用酒精灯微微加热干燥。
固定:将干燥后的涂片在酒精灯火焰上快速通过 2 - 3 次,使细菌固定在载玻片上。注意温度不宜过高,以免破坏细菌形态。
染色:在固定好的涂片上滴加结晶紫染液,覆盖整个涂片,染色 1 - 2 分钟后,用蒸馏水缓慢冲洗,将染液冲洗干净。
媒染:滴加碘液,覆盖涂片,作用 1 - 2 分钟,使结晶紫与碘形成复合物,增强染料与细菌的结合力,然后用蒸馏水冲洗。
脱色:这是关键步骤,用 95% 乙醇滴加在涂片上进行脱色,脱色时间一般为 20 - 30 秒。脱色时要注意观察涂片颜色变化,当涂片颜色不再脱落后,立即用蒸馏水冲洗,终止脱色。
复染:滴加番红染液,复染 1 - 2 分钟,使革兰氏阴性菌染上红色,然后用蒸馏水冲洗,干燥。
镜检:干燥后,将涂片放在显微镜下,先用低倍镜找到细菌,再换用高倍镜或油镜观察细菌的形态和颜色。革兰氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色。