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六胺银染色又称 PASM 染色,是临床常用的一种组织化学染色技术,以下是关于它的详细介绍:
染色原理:标本经高碘酸等氧化剂氧化后,使真菌和其他机会性生物的细胞壁内的粘多糖以及组织基底膜内的多糖暴露出醛基,醛基将六胺银还原为黑色的金属银,从而使真菌、基底膜等被染成黑色。硫代硫酸钠对已显色的银盐起固定作用,并除去未反应的银离子。
染色步骤
切片预处理:石蜡切片进行常规的脱蜡至水洗步骤,以去除切片上的杂质和油脂,为后续染色做好准备。
化学处理:将切片依次放入 5% 铬酸水溶液处理 1 小时,随后用自来水冲洗 5 分钟;再放入 1% 亚硫酸氢钠水溶液中处理 30 分钟,之后用自来水冲洗 3 分钟,并用蒸馏水充分洗涤,以去除多余的化学物质。
六胺银染色:将预热至 60°C 的六胺银应用液倒入染色缸中,将切片放入并染色 1 小时。期间需密切观察切片颜色变化,当切片呈现淡黄色且显微镜下观察到淡棕色菌体时,应每隔 5-10 分钟观察一次,以精确控制菌体着色深浅,直至达到理想的显色效果。随后,用蒸馏水洗涤切片 5-6 次。
后续处理:将切片放入 0.1% 氯化金水溶液中调色 4 分钟,再用蒸馏水洗涤 1-2 分钟;接着放入 3% 硫代硫酸钠水溶液中处理 5 分钟,以进一步稳定染色效果。然后自来水洗 1 分钟,蒸馏水洗 1 分钟。
复染与封片:将切片放入淡绿染液中复染 20 秒,随后用流水冲洗 20-60 秒以去除多余染液。最后,经过 95% 酒精和无水酒精脱水、二甲苯透明处理,用树胶封片,以备观察。