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LFB 染色即劳克坚牢蓝(Luxol Fast Blue)染色,是一种常用于显示神经组织中髓鞘结构的染色方法,以下是关于它的详细介绍:
染色原理:LFB 属于铜 - 酞箐染料,是一种酒精溶性染料。髓鞘由髓鞘细胞和细胞膜组成,其成分主要是类脂质和蛋白质,其中的脂蛋白与 LFB 染料发生酸 - 碱反应,脂蛋白碱基取代 LFB 染料的碱基,形成深蓝色沉淀,从而使髓鞘着色。
染色步骤
石蜡切片脱蜡至水:将石蜡切片依次放入二甲苯中浸泡 20 分钟,然后再放入第二个二甲苯中浸泡 20 分钟,以充分脱蜡。接着,将切片放入无水乙醇中浸泡 10 分钟,再放入第二个无水乙醇中浸泡 10 分钟,之后依次放入 95%、90%、80% 和 70% 酒精中,每个浓度的酒精浸泡 5 分钟,最后用蒸馏水进行洗涤。
染色:将 0.1% 固蓝溶液在 65℃烘箱提前预热 30min,把脱蜡至水后的组织切片放入预热的 0.1% 固蓝溶液中,65℃染色 4 小时,期间加盖防止液体蒸发。
分化:室温自然冷却后取出切片,自来水洗至呈无色。随后将切片迅速浸入 0.05% 碳酸锂分化液中快速分化 5 秒,然后取出切片立即置于 70% 乙醇中快速分化 10 秒,可交替进入 0.05% 碳酸锂分化液和 70% 乙醇中进行分化,及时镜检直至髓鞘呈蓝色、背景无色,最后水洗终止分化。
脱水、透明与封片:切片经 3 次无水乙醇脱水,每次 5 分钟,再经二甲苯透明 5 分钟,最后用中性树胶封片。