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TTC 染色即 2,3,5 - 氯化三苯基四氮唑染色,以下是关于它的详细介绍:
基本原理:TTC 是一种脂溶性光敏感复合物,无色且可溶于水。活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶等脱氢酶可将 TTC 还原,生成红色不溶性的三苯甲臜。正常组织中的脱氢酶活性正常,与 TTC 反应后呈红色;而缺血、坏死组织内脱氢酶活性下降或丧失,不能与 TTC 反应,组织不会产生颜色变化,仍呈苍白,从而可通过颜色变化区分正常组织和受损组织。
染色步骤:
取材:以脑缺血损伤研究为例,可麻醉动物后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑,取脑时要保持大脑的完整性。
速冻:将取出的脑组织放入 - 20℃冰箱中速冻 20 分钟左右,便于后续切片。
切片:一般切成 5-6 片,每隔 2mm 切一片。第一刀在脑前极与视交叉连线中点处,第二刀在视交叉部位,第三刀在漏斗柄部位,第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。如果需计算面积,应切得均匀或用专门的脑槽。
染色:将切片置于浓度为 1%-2% 的 TTC 溶液中,用锡箔纸盖住,放入 37℃温箱 15-30min,并不时翻动脑片,使均匀接触到染色液。也可以将脑片放入多孔板,再滴入 TTC,覆以圆形盖玻片使均匀染色。
观察与分析:染色完成后,可肉眼或在显微镜下观察,红色区域为存活组织,白色区域为坏死组织。还可使用图像分析软件如 ImageJ 计算坏死区域占比,进行定量分析。